慢病毒載體(Lentiviral vector)較逆轉錄病毒載體有更廣的宿主范圍，慢病毒能夠有效感染非周期性和有絲分裂后的細胞。慢病毒載體能夠產生表達siRNA的高滴度的慢病毒，在周期性和非周期性細胞、干細胞、受精卵以及分化的后代細胞中表達siRNA/miRNA,實現(xiàn)在多種類型的細胞和轉基因小鼠中特異而穩(wěn)定的基因表達的功能性沉默，為在原代的人和動物細胞組織中快速而高效地研究基因功能，以及產生特定基因表達降低的動物提供了可能性。慢病毒作為siRNA/miRNA的攜帶者，不但具備特異性地使基因表達沉默的能力，而且充分發(fā)揮了慢病毒載體自身所具備的優(yōu)勢，為基因功能的研究提供了更強有力的工具。
 

　　慢病毒包裝的原理
 

　　慢病毒(Lentivirus)是逆轉錄病毒的一種。構建的siRNA / miRNA慢病毒載體，與化學合成的siRNA 和基于瞬時表達載體構建的普通 siRNA 載體相比，一方面可以擴增替代瞬時表達載體使用，另一方面，Lentivirus-siRNA 克隆經過慢病毒包裝系統(tǒng)包裝后，可用于感染依靠傳統(tǒng)轉染試劑難于轉染的細胞系如原代細胞、懸浮細胞和處于非分裂狀態(tài)的細胞，并且在感染后可以整合到受感染細胞的基因組，進行長時間的穩(wěn)定表達。
 

　　慢病毒包裝的簡單流程
 

　　1) 含有目的基因的慢病毒 RNAi 干擾載體的構建和質粒純化提取。
 

　　2) 慢病毒載體，包裝系統(tǒng)共轉染病毒包裝細胞293T等。
 

　　3) 培養(yǎng) 48hrs - 72hrs 左右，收集含you病毒的上清培養(yǎng)液。
 

　　4) 病毒的純化和濃縮。
 

　　5) 分裝，- 80 ℃保存。
 

　　6) 滴度測定目的基因檢定，并出具檢測報告。
 

　　慢病毒包裝存在的問題
 

　　盡管慢載體的研究有了很大進展，但距離臨床應用還有很長的路要走。首先，重組病毒的滴度還不夠高，除Naldini等報道的結果外，其余均在101TU/ml~103TU/ml之間，難以達到體內應用的需要；其次，由于HIV復雜的生物學性質，要像目前常用的小鼠逆轉錄病毒載體那樣建立穩(wěn)定的HIV載體包裝細胞十分困 難，已建立的包裝細胞均不理想。據(jù)報道，Vpr是一種使細胞進入靜止期的強誘導劑，也是建立包裝細胞的主要障礙之一。如果確如前文所述，包裝質粒中的vpr基因并非必需、去除后不影響載體的轉導能力，則建立穩(wěn)定的包裝細胞是大有希望的。
 

　　在保證HIV-1載體的安全性上，迄今已做了種種努力，要產生有復制力的HIV,必須在不同的質粒上發(fā)生多次非同源重組事件。即使如此，一旦用于人體試驗，仍然不能打消人們對感染有復制力的HIV-1的顧慮。更為謹慎的做法是，以非人類的慢病毒為基礎構建載體，如猴免疫缺損病毒(SIV)、豬和牛免疫缺損病毒(FIV和BIV)、馬傳染性貧血病病毒等，而目前這些工作尚屬空白。